常見問題
1)為了保證檢測質(zhì)量,臨床PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充分合理的空間,良好的照明和空調(diào)設(shè)備。工作環(huán)境雖不是檢測質(zhì)量的直接原因,但寬敞舒適的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境將肯定有利于檢驗(yàn)質(zhì)量的保證。
2)合理有效地對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行管理,定期做維護(hù)和校準(zhǔn),使其處于一個(gè)良好的狀態(tài)。例如,定期校準(zhǔn)移液器,使其保持足夠的準(zhǔn)確度和精密度。定期維護(hù)熒光定量PCR儀的光學(xué)系統(tǒng)和反應(yīng)孔間溫度差異,使其保持在良好狀態(tài)和允許的范圍內(nèi)。此外,還包括天平,離心機(jī),冰箱等設(shè)備的管理。
3)理想的試劑:主要有內(nèi)外兩個(gè)因素,內(nèi)在因素包括標(biāo)本處理方法,用于核酸擴(kuò)增的原材料及方法學(xué)設(shè)計(jì)等。外出因素包括試劑盒的運(yùn)輸和保存中的問題。
4)標(biāo)準(zhǔn)化操作流程:完整的臨床PCR程序由標(biāo)本采集,運(yùn)送,保存,編號(hào),試劑準(zhǔn)備,核酸提取,擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測,結(jié)果分析和報(bào)告等諸多環(huán)節(jié),建立科學(xué)和與本實(shí)驗(yàn)室配套的SOP文件,嚴(yán)格按SOP進(jìn)行操作。
5)主要污染源和防污染措施:PCR的主要污染源有標(biāo)本中的大量待測微生物,克隆質(zhì)粒,大量存在實(shí)驗(yàn)室中的特定微生物以及以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染等。這些都是實(shí)驗(yàn)室最容易造成假陽性的污染。因此,必須嚴(yán)格分區(qū)實(shí)驗(yàn)室及遵守工作流程,使用化學(xué)清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)面,使用紫外線照射和UNG方法消除擴(kuò)增產(chǎn)物污染等等。
6)進(jìn)行室內(nèi)和室間質(zhì)量控制,室內(nèi)質(zhì)量控制可以確保實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)測定質(zhì)量的一致性,室間質(zhì)量控制可以提供將實(shí)驗(yàn)室測定情況與一室間和客觀標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行回顧性比較的數(shù)據(jù)。